Straipsniai

Rekombinantinės DNR technologija


Kiekviename DNR fragmente, kuris yra suskaidytas ir atskirtas nuo likusios genetinės medžiagos, yra vienas ar keli genai.

Prisimink tai kiekvienas genas duoda baltymąTaigi tirdami geną tiriame baltymus, kuriuos jis koduoja.

Bet ką reikėtų daryti norint ištirti geną?

Turime jį įtraukti į šeimininko genetinę medžiagą (DNR), kad įvyktų mRNR geno transkripcija ir baltymų transliacija.

šeimininkas Tai greitai daugintis (daugintis) organizmas, pavyzdžiui, bakterijos. Kai bakterijos dauginasi per dvi dalis, jos perduoda savo genetinę medžiagą savo „vaikams“, taigi, jei šioje medžiagoje yra tiriamo DNR fragmentas, netrukus turėsime milijonus bakterijų su genu.

plazmidė Tai žiedinė genetinė medžiaga, nepririšta prie chromosomos, plinta bakterijų hialoplazmoje. Ji patiria tą patį procesą kaip ir chromosomų DNR transkripcija ir transliacija, ir dauginasi su kiekviena ląstelės dalijimu, perduodama kopiją į kiekvieną „dukterinę“ ląstelę.

Iš bakterijų ląstelių pašalinama plazmidė, kad tyrimo geną būtų galima įterpti ir pakeisti bakterijoje.

Norėdami geriau suprasti, pažinkite šį procesą žingsnis po žingsnio (sekite paveikslėlyje):

  1. Tyrėjai nori ištirti žmogaus geną, iš kurio gaminamas baltymas, kurio funkcionavimas nežinomas.
  2. Tyrėjai „iškirpo“ (naudodami restrikcijos fermentus) iš žmogaus DNR, dominančio geno.
  3. Šis DNR fragmentas, kuriame yra genas, yra dauginamas PGR, kad būtų gautos kelios to paties fragmento kopijos (arba ta pati informacija).
  4. Bakterinės plazmidės skaidymui naudojamas tas pats fermentas, kuris suskaidė žmogaus DNR geną. Atminkite, kad suskaidžius DNR fragmentą, susidaro lipnūs patarimai, kurie papildo plazmidę, jei jie suskaidomi tuo pačiu fermentu.
  5. Tada suskaidyta plazmidė sumaišoma su DNR fragmentais (turinčiais geną) ir fermentas, vadinamas ligaze, „priklijuoja“ fragmentus prie plazmidės, sudarydamas vadinamąją plazmidę. Rekombinantinė DNR. Atlikus rekombinantinę DNR, ji įvedama į bakteriją-šeimininką.
  6. A priimančiosios bakterijos Jis dedamas į selektyvią maistinę terpę, kolonijose auga tik tie, kurie turi rekombinantinę DNR. Po daugelio bakterijų kartų genų ekspresijos produktas, žmogaus baltymai, yra išgryninamas iš bakterijų (jie yra atskirti nuo bakterijų baltymų).

Šis metodas sukuria didelį kiekį žmogaus baltymų, todėl jį galima ištirti.